1.提高實驗的效率

1）實驗前有計劃安排、預(yù)備方案或者“車輪戰(zhàn)"（細胞實驗）

一般從基礎(chǔ)的培養(yǎng)細胞開始，開始實驗時，實驗方法一般來自于實驗室或者文獻中條件優(yōu)化以及自我推測及驗證，因此做實驗之前預(yù)想實驗方案有助于我們不至于“手忙腳亂"。

以實驗前的細胞鋪板實驗為例：

表1 常用細胞培養(yǎng)體系：

細胞鋪板的孔數(shù)一般取決于我們后期實驗的目的，實驗前了解各類細胞的鋪板數(shù)量以及培養(yǎng)基添加量都十分重要。以病毒或者細菌感染細胞模型來說，我們需要一個比較準確數(shù)量級的細胞數(shù)目和病毒或菌液濃度得后期實驗的MOI值，細胞計數(shù)和病毒及菌液濃度測定也很關(guān)鍵；

細胞鋪板：我們需要收集盡可能多的細胞，原因是當我們剩余出來的細胞可用于細胞傳代繼續(xù)保留，可若是鋪板數(shù)目達不到（重新離心收集細胞浪費時間）可能會導(dǎo)致加藥濃度過大使得細胞大量死亡而影響后期實驗，比如你要提取RNA或者蛋白，細胞數(shù)目不足，后期的RNA濃度或者BCA測蛋白濃度的結(jié)果都不是非常理想繼而影響后面實驗的進展。

2）具體安排（Western blot實驗）

從試驗干擾開始（給藥處理），根據(jù)實驗步驟來講，完整的Western blot實驗預(yù)計2-3天。

（1）以給藥時間24h為例：24h后，收集細胞提取蛋白，貼壁細胞加IP裂解液或RIPA裂解液用細胞刮板移至1.5ml離心管；懸浮細胞收集細胞至離心管離心去除培養(yǎng)基，用PBS清洗離心去除上清再加入裂解液，預(yù)計提取蛋白以及BCA測蛋白濃度一上午的時間，估計上樣體積加入loading buffer煮蛋白置于-80℃保存；下午跑蛋白電泳，SDS-PAGE膠可于前一天晚上制好防止-4℃冰箱保存（用少量純水用封裝袋保存）或使用預(yù)制膠，大概1多小時蛋白maker跑到距離膠最下面1-2cm處停止電泳；轉(zhuǎn)模，根據(jù)目的蛋白的大小確定轉(zhuǎn)膜時間和毫安數(shù)，結(jié)束后裁膜用5%脫脂奶粉封閉，之后孵育一抗4℃過夜，第二天洗膜孵育二抗并進行顯影，因此步驟時間熟練的話2天就可以完成一次WB實驗。

（2）預(yù)備方案：實驗重復(fù)是不可避免的，因此預(yù)備下一周期實驗方案（車輪戰(zhàn)）有助于縮短時間提高效率，當然，師兄師姐以及廣大學(xué)術(shù)里的經(jīng)驗小tips也有助于提高實驗效率。例如，在WB配制SDS-PAGE膠的凝固時間通常會隨季節(jié)溫度的變化而改變，夏季和冬季應(yīng)該時間就會產(chǎn)生差異（冬季凝固較慢），再者，AP 和TEMED 作為促凝劑，一般都是最后加入，尤其是AP（過硫酸銨）。實驗之前我們可能都會設(shè)計一個預(yù)期結(jié)果，我們可以在上一周期實驗的空余時間預(yù)備下一周所需要的實驗條件，例如重新細胞鋪板給藥等待時間周期等等。

2.提高實驗結(jié)果的質(zhì)量：減小系統(tǒng)誤差，消除人為錯誤

①減小系統(tǒng)誤差：一般設(shè)計3個重復(fù)孔，但是后期我統(tǒng)計數(shù)據(jù)時發(fā)現(xiàn)，誤差bar仍可能較長，這時我們可以設(shè)計4個復(fù)孔，去除一個誤差最大的值也有助于結(jié)果的準確性。這時就要求我們會更加精準的使用移液槍。另外，重復(fù)實驗也有助于提高我們加樣的準確性。

②制備預(yù)混液：例如我要做30(2×5×3)孔兩個基因（包含內(nèi)參），5個處理，3個復(fù)孔，那么我的熒光染料一個孔需要5ul，正反引物2ul，那么我們可以再不浪費試劑的情況下，計算量可為:15.5×5+15.5×2或者（15×5+15×2）×1.1，這一定程度上都是為了消除我們?nèi)藶榧訕诱`差。

③另外我們盡量增大加樣體積減少誤差：針對于10ul體系，提前將正反引物混合，配制SYBY+正反引物和cDNA+ddH2O，這時的體積為6+4或者7+3可減少加樣體積小帶來的加樣誤差。

④相關(guān)試劑使用前需離心使用：另外，在八聯(lián)管上機前需要用干凈的手套蓋上透明蓋子，適當離心將反應(yīng)體系離心至管底。

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